Determinar cuantitativa de lactato deshidrogenasa.
Fundamento teórico:
El lactato deshidrogenasa cataliza la reducción del piruvato por el NADH.
LDH
Piruvato + NADH+H+-------->lactato +NAD+
Esta determinación se realiza mediante cinética. se realiza varias medidas separadas por un tiempo. Es descendente.
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado es proporcional a la concentración catalítica de LDH.
Significado clínico:
El lactato deshidrogenasa es una enzima distribuida por todo el organismo humano, aunque las mayores concentraciones se encuentran en el corazón, hígado, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.
El nivel de LDH en suero está elevado en pacientes con enfermedades de hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales, disfrotas musculares y anemias.
Materiales y Reactivos:
-Cubetas.
-Espectrofotómetro.
-Baño termoestable.
-R1 Tampón.
-R2 Substrato.
-Suero
-Encender el espectrofotómetro.
-Indicar las siguientes condiciones de trabajo:
Longitud de onda --------340nm
Cubeta -------1cm paso de luz
Temperatura constante -- 25ºC/30ºC/37ºC
-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente con agua destilada
-En un tubo de ensayo añadir 50 microlitros de muestra y 3ml de reactivo de trabajo, mezclar y añadir a una cubeta.
-Incubar durante 1 minuto.
-Leer la absorbancia inicial de la muestra poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada 3 minutos
-Calcular el promedio de incremento de absorbancia por minuto.
Resultados:
1-1.873
2-1.859
3-1.846
4-1.833
Concentración= 130
1.873-1.859=0.014
1.859-1.846=0.013
1.846-1.833=0.013
(0.014+0.013+0.013)/3=0.013
0.013*9690=195.97 U/L LDH.
Observaciones:
En las prácticas cinemáticas no hay patrón porque nos da el fabricante el factor, el blanco de reactivo tampoco es necesario porque medimos los saltos.
Conclusiones:
En esta práctica hemos obtenido un valor de 195.97 U/L LDH, valor fuera del intervalo de referencia (230-450)U/L
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