Aprender a utilizar correctamente el espectrofotómetro.
Fundamento teórico:
La espectrofotometría es la medida de cantidad de luz absorbida o transmitida por una solución que contiene una concentración desconocida de soluto y de un patrón que conocemos la concentración.
El objetivo de la práctica claramente es saber la concentración desconocida de soluto por lo que aplicamos la ley de Lambert y Beer (afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentración).
La formula de la ley de Lambert y Beer es :
A=a.b.c
A=Absorbancia
a=Coeficiente de absorción (L/mol.cm)
b=Longitud de paso de la luz (cm)
c=Concentrcaión del analito (mol/l)
El coeficiente de absorción es característico para cada sustancia, es constante cuando se fijan las condiciones de longitud de onda, pH y temperatura.
Las aplicaciones de la ley de Lambert y Beer son las siguientes:
-Determinar la concentración de una solución aplicando la fórmula ya mencionada.
-Determinación de estructuras moleculares.
-Identificación de unidades estructurales específicas ya que tienen absorbancia esepcíficas.
-Determinar constantes de disociación de indicadores acido-base.
Materiales y Reactivos:
-Espectrofotómetro
-Tubos de ensayo.
-Cubetas de espectrofotometría.
-Agua destilada.
-Pipetas.
-Cromógeno( azul).
-Cromógeno (amarillo).
Procedimiento:
1-Elaborar dos baterias de diluciones seriadas . Una de ellas constará de cinco tubos, con ml cada uno de ellos ( por lo que en el último desechamos los 4 ml sobrantes al fregadero y en el la otra 3 ml) con un factor de 1/2. En este caso utilizaremos el cromógeno azul ( azul de metileno).La otra estará formada por cuatro tubos con 3 ml cada uno y un factor de 1/3.
2- Elegir la longitud de onda más adecuada correspondiente a cada cromógeno.
3-Antes de medir la absorbancia de de los tubos debemos hacer un blanco, en este caso sería solamente agua destilada, para evitar errores.
4-Medir la absorbancia de ambas baterias.
5-Crear una curva de calibración.
6- Obtenemos la obsorbancia de un tubo problema ( del cual no conocemos la concentración).Calculamos la concentración a partir de las curvas de calibración.
Resultados:
Azul
Utilizamos una absorbancia de 670 nm
Patrones
Concentraciones (mgl/dl) Absorbancia
800 0.918
400 0.482
200 0.242
100 0.097
El tubo problema nos dió una absorbancia de 0.275
Concentración=0.275/0.0012=229 mg/dl
Amarillo
En cada tubo arratramos :volumen final /d-1= 3/2=1.5 ml
Utilizamos una absorbancia de
Patrones
Absorbancia Concentración
>2.200 600
1.65 200
0.723 66.66
0.298 33.33
Observaciones:
Debemos partir de un banco de diluciones bien hecho para para obtener unos resultados válidos.
Las concentraciones de los tubos problemas se calcula dividiendo la concentración del tubo del que cogemos los ml por el factor de dilución.
Ejemplo en el primer caso sería:
800/2=400
-No encuentro el valor de la absorbancia del tubo problema amarillo, en caso de tener dicho valor para averiguar su concentración hariamos:
Absorbancia del tubo problema amarillo/0.0086
Conclusiones:
Como conclusión podemos destacar la importancia de utilizar unas cubetas limpias y que no esten ralladas, también debemos colocar la cubeta bien en el espectrofotómetro , debemos colocar la parte lisa por donde pasa la luz . Y por último concluir que debemos utilizar la longitud más adecuada
No hay comentarios:
Publicar un comentario