3-Separación de una mezcla de aminoácidos por cromatografía en una capa fina.

Objetivo:

Separar e identificar aminoácidos.


Fundamento teórico:

Esta técnica cromatográfica utiliza una placa inmersa verticalmente, se suele utilizar una fase estacionaria polar ( gel de sílice) adherida a una superficie sólida ( vidrio o plástico). La fase móvil y estacionaria dependen del tipo de moléculas a separar.

Normalmente la cromatografía es un método ascendente, permite que el eluyente ascienda por la capa gracias a la capilaridad.

Hay enfermedades clínicas en las que se produce una alta concentración de aminoácidos en el plasma y en la orina.  Este desequilibrio en la sangre se denomina aminoaciduria.


Materiales y Reactivos:

-Atomizador.
-Láminas de gel de celulosa.
-Disolvente de cromatografía.
-Disolución reveladora (resuspender 0.2g de ninhidrina en 100 ml de acetona).
-Mezcla de aminoácidos.
-Muestras patrón de aminoácidos.
-Vaso precipitado.
-Micropipeta.


Procedimiento:

-Colocar el disolvente en un vaso precipitado de forma que el fondo cubra 1cm.
-Coger una placa de gel de celulosa de 10 x 5  cm.
- Con un lápiz marcar los puntos donde se van a colocar las marcas, estas deben estar separadas 1.5 cm de la base y separadas entre sí 1 cm.
 
-Aplicar 2 microlitros de la muestra en el punto señalado con lápiz.
 
-Secar al aire libre.
-Introducir verticalmente la placa en el vaso precipitado con el disolvente durante 1 hora.
 
-Caundo el frente haya subido 8 cm, sacamos la placa del vaso precipitado y marcamos con un lápiz hasta donde ha llegado la fase móvil.
- Secar la placa.
-En posición vertical aplicamos a la placa revelador de ninhidrina  ( pulverizado). Este paso debe hacerse en campana  o al aire libre.
 
-Calentar unos minutos a 105ºC.

Resultados:

M1=4.3/6.5=0.66
M2 =3.2/6.5=0.49

M3=1.9/6.5=0.29

Observaciones:

La estufa que disponemos en el laboratorio tiene un máximo de 80ºC , como consecuencia al poco tiempo la placa perdió el color rosáceo.


Conclusiones:

Como conclusión podemos destacar la importancia de la ninhidrina en esta práctica puesto que reacciona con  casi todos los aminoácidos ( gracias a su grupo amino) permitiendo el reconocimiento de estos. Gracias al patrón podemos saber que:

Muestra 1:L-glutánico
Muestra 2:ácido fenilalanina
Muestra 3:Arginina (el pocillo que menos ha corrido).