Determinación de glucosa en orina/suero mediante hexoquinasa.

Objetivo:

Determinación de glucosa.

Fundameno teórico:

La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa por ATP a glucosa 6- fosfato. La glucosa-6-fosfato originada es reducida a 6-fosfoglucanato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela a NAD a NADH.

El aumento de concentración de NADH en el medio es proporcional a la concentración de glucosa.

Valor de referencia  en el suero: (60-110) mg/dl.

Valor de referencia en la orina: (0-15) mg/dl.


Materiales y reactivos:

-Reactivo 1 (TRIS pH 7.5, ATP y Mg+2).

-Reactivo 2 (NAD+, Hexoquinasa y Glucosa-6-fosfato).

-Muestra de orina y suero.

-Espectrofotómetro.

-Cubeta.

-Tubo de ensayo.

-Agua destilada.


Procedimiento:

-Preparación del reactivo de trabajo( disolver el R2 en el R1).
 

-Coger tres tubos de ensayo, preparar en uno el blanco, en otro el patrón y en el último la muestra.

-El blanco se prepara con 1ml de reactivo de trabajo.

-El patrón se prepara con 1ml de recativo de trabajo y 10 μL   de patrón.

-La muestra se prepara con 1ml de reactivo de trabajo y 10 μL de muestra de orina.


-Cada disolución se echa en una cubeta.
 

-Medir en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 340 nm.

-Anotar los resultados.

-Repetir este procedimiento con la muestra de suero.


Resultados:

Orina

Muestra: 0.045

Patrón: 0.018

Blanco: 0.012

(0.045-0.012)/(0.018-0.012)*100=0.027mg/dl

Suero

Muestra: 0.328

Reactivo: 0.315

Blanco: 0.084

(0.328-0.084)/(0.315-0.084)*100= 105.62 mg/dl


Conclusiones:

El valor de la  glucosa en orina es  0.027 mg/dl, alto si lo comparamos con los valores de referencia.
El valor de la glucosa en suero es 105.62 mg/dl,  dentro de los valores de referencia.
El valor alto de la glucosa puede ser porque haya cometido algún error durante la elaboración de la práctica, tendriamos que repetir el ensayo para confirmar el resultado.