Hemoglobina A1c

Objetivo:

Determinación de la hemoglobina A1c.

Fundamento teórico:

La hemoglobina es una hemoproteína (estructura cuatenaria), de color rojo característico, que transporta dioxígeno desde los organos respiratorios hasta los tejidos.

La prueba de hemoglobina glicosilada A1c  es una examen de sangre para evaluar la diabetes de tipo 2 y preadiabetes, podemos medir el nivel de glucosa de los últimos tres meses. El resultado de la hemoglobina A1c se entrega en porcentaje.

La hemoglobina A1c se eluye de forma específica, previa eliminación por lavado de la hemoglobina (A1a+b)  y se cuantifica por lectura fotométrica a 415nm. La estimación  de la concentración realativa de HbA1c se realiza frente a la concentación de hemoglobina total, determinada también por lectura fotométrica a 415nm.

 Valores de referencia:

(4-6.5)%-------------- No diabético
(6-7)%  -------------- Objetivo
(7-8)%---------------- Buen control
(>8)% ---------------- Precisa actuación


Materiales y Reactivos:

-Reactivo 1 (Ftalato de potasio 50mmol/L, detergente  5g/l, azida de sodio 0.95g/l pH 5).

-Reactivo 2 (Tampón fosfatos 30mmol/L,  pH 6.5, azida de sodio 0.95g/l).

-Reactivo 3 (Tampón fosfatos 72mmol/L, pH 6.5, azida de sodio 0.95g/l).

-Microcolumnas (Contienen resinas de intercambio catiónico equilibrada con tampón fosfatos 72mmol/L, pH 6.5, azida de sodio 0.95 g/l).

-Cubetas.

-Espectrofotómetro.

- Tubo de ensayo.



Procedimiento:

-Atemperar los reactivos y columnas.

-En un tubo de ensayo, añadimos 50 μL de sangre y 200 μL de reactivo 1. Agitar y dejar a temperatura ambiente.

-La columna se debe poner unos minutos en posición invertida para que la resina no este tan apretada (5-10 minutos). Volver a colocar en posición vertical. Destapar la parte superior de la columna y romper la lengueta. Empujamos hasta que toque el filtro la resina. Dejar gotear hasta que el líquido alcance el nivel de líquido alcance el nivel del disco, desechando el eluido.

-Aplicar sobre el disco el tubo de ensayo que habiamos preparado anteriormente  (hemolizado). Desechar el eluido.

-Añadir 200μL de reactivo 2 , desechamos el eluido.

-Añadir 2ml de reactivo 2, desechar el eluido, (pasan las hemoglobinas que no me interesan).

-Añadir 4ml de reactivo 3, recoger el eluido (cambia el pH y se despeje la hemoglobina que me interesa).

-Para cuantificar la hemoglobina lo lleva al espectrofotómetro con un patrón que tenga todos Hb total.

-Anotar los resultados.


Resultados:

Patrón -0.569

Muestra-0.298



0.298/(3*0.569)*100=17.45% HbA1c 











Conclusiones:

El nivel de hemoglobina A1c ha salido muy alto, fuera de los valores de normalidad , tendriamos que repetir la práctica para confirmar el resultado. Si se confirma el resultado seguramente tenga diabetes tipo2 y hay que tratar al paciente urgentemente.