Urea

Objetivo:

Determinación cuantitativa de urea.

Fundamento teórico:

La cantidad de urea presente en la sangre permite detectar si los riñones tienen problemas para reabsorber la urea, que es un producto de desecho del hígado y del resto del cuerpo.

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhidrido carbónico.
Los iones amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito, en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

Valores de referencia: (15-45)mg/dl.

Materiales y Reactivos:

-Cubeta

-Espectrofotómetro

-Tubos de ensayo

-Gradilla

-Reactivo 1 (Tampón fosfato pH 6.7, EDTA, Salicilato sódico y Nitroprusiato sódico)

-Reactivo 2 (Hipoclorito sódico e hidróxido sódico)

-Reactivo 3 (Ureasa)

-Muestra (suero)

Procedimiento:

-Preparación del reactivo de trabajo: disolver R3 en el vial de R1.

-El R3 con ClONa está listo.

-Cogemos tres tubos de ensayo, uno para el blanco añadimos 1ml de reactivo de trabajo y otro ml de reactivo 2. Otro tubo para el patrón que está compuesto de 1ml de reactivo de trabajo, 1ml de reactivo de trabajo y 10 μL de patrón y por último el tubo de la muestra debe contener 1ml de reactivo de trabajo, 1ml de reactivo 2 y 10μL de muestra.

-Pasar el contenido de los tubos a tres cubetas.

-Medir la absorbancia en un espectrofotómetroa una longitud de onda de 580nm.

Resultados:

Blanco 0.0
Patrón 0.29
Muestra 0.314

(0.314/0.29)*50= 54.13mg/dl

Conclusiones:

El valor está fuera de los valores de normalidad.