Determinación del HDL-colesterol por espectrofotometría.

Objetivo:

Determinación del HDL.

Fundamento teórico:

El colesterol pertenece al grupo de lípidos que es útil para las fibras nerviosas, paredes celulares y equilibrio de ciertas hormonas.

El colesterol HDL (colesterol bueno) son lipoproteínas de alta densidad que realizan  la función de eliminar el exceso del colesterol (colesterol malo).

Los niveles de colesterol deben ser HDL-alto y LDL-bajo, y  si fuera a la inversa la persona necesita un cambio de dieta inmediatamente.

Mediante un precipitado de proteínas se consigue precipitar las lipoproteínas de baja densidad y las de muy baja densidad (LDL y VLDL ),quedando en el sobrenadante las lipoproteínas de alta densidad.


Valores de referencia:



HDL-colesterol
Hombres
Mujeres
Riesgo menor
>55mg/dl
>65mg/dl
Riesgo normal
35-55mg/dl
45-65mg/dl
Riesgo elevado
<35mg/dl
<45mg/dl




LDL-Colesterol

Valores sospechosos a partir de
150mg/dl
Valores elevados a partir de
190mg/dl


Materiales y Reactivos:

-Muestra (Suero).

-Cubeta.

-Espectrofotómetro.

-Baño María.

-Reactivo A (ácido fosfotungstico 14mM y cloruro de magnesio 2mM).

-Reactivo B (reactivo colesterol).

-Eppendorf.

-Gradilla.



Procedimiento:

-En un tubo de centrifuga añadimos 1ml de muestra y 0.1ml de R.A (precipitante).

-Mezclar y dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente .

-Centrifugar 2 minutos a 12000rpm.

-Llevarlo a una cubeta y medir su absorbancia con el espectrofotómetro.

-En un tubo de ensayo realizamos el blanco en el que pondriamos 1ml de reactivo B.
 

-En otro tubo preparamos la muestra a la que añadimos 0.02ml ded sobrenadante y 1ml de reactivoB.

-Incubar durante 5 minutos a 37ºC.


-Llevar las disoluciones de los tubo a dos cubetas (una para cada tubo).

 -Medimos en el espectrofotómetro a 505nm .



Resultados:

Colesterol: 60.31 mg/dl
Triglicéridos: 76.74mg/dl
HDL:0.256*320=81.92mg/dl

Aplicamos la formula de Friedewal

LDL=Colesterol total -(76.74/5)-81.92

LDL=-36.95mg/dl


Conclusiones:

El resultado es negativo, una de las causas puede ser que no precipitara todas las lipoproteínas de baja y muy baja densidad.






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